Vrije Universiteit Amsterdam

Over het binnenmembraan en verder


* Startdatum25-11-2008


* Tijd13.45


* LocatieAula


* TitelAcross the inner membrane and beyond. Signal peptide-mediated protein transport via the Tat and autotransporter pathways of Escherichia coli


* PlaatsAula


* SprekerW.S.P. Jong


* Promotorprof.dr. B. Oudega


* OnderdeelFaculteit der Aard- en levenswetenschappen


* WetenschapsgebiedAard- en levenswetenschappen


* EvenementtypePromotie

Promovendus Wouter Jong onderzocht met biochemische experimenten het signaal peptide-gemedieerd transport van eiwitten via de Tat- en autotransporter routes van de Gram-negatieve bacterie Escherichia coli.
De inhoud van Gram-negatieve bacterie wordt gevormd door het cytoplasma waar zich ribosomen bevinden die eiwitten produceren. Het cytoplasma wordt afgesloten van de buitenwereld door een complexe celenvelop die bestaat uit een binnenmembraan en een buitenmembraan waartussen zich het periplasma bevindt. Eiwitten met een eindbestemming voorbij het binnenmembraan worden vaak aangemaakt met een afknipbaar signaal peptide dat bepaalt via welke route het binnenmembraan wordt bereikt en via welke weg het membraan wordt gepasseerd. In een poging factoren te identificeren die betrokken zijn bij de targeting van substraten van de Tat route naar het binnenmembraan analyseerde Jong de moleculaire interacties van Tat signaal peptiden in het cytoplasma. Tat signaal peptiden bleken een intieme interactie aan te gaan met Trigger factor, suggererend dat dit eiwit een voorname rol speelt in het Tat targeting proces. Deze rol werd echter niet ondersteund door vervolgexperimenten in levende cellen die lieten zien dat TF weinig invloed heeft op het transport van Tat afhankelijke eiwitten naar het periplasma. De autotransporter route wordt gebruikt door ziekteverwekkende Gram-negatieve bacterie om grote virulente eiwitten uit te scheiden in het extracellulaire milieu. Jong karakteriseerde het transport van het Hemoglobine protease (Hbp), een autotransporter eiwit dat een speciaal signaal peptide bezit met een lange extensie. Hij toont aan dat deze extensie niet betrokken is bij de selectie van een specifieke targeting route naar het Sec translocon in het binnenmembraan. Verder vond hij dat tijdens de passage van het translocon het signaal peptide in contact is met de membraancomponent YidC. YidC blijkt van belang voor de uitscheiding van Hbp en is mogelijk betrokken bij bereiken van de correcte vouwingsstaat van Hbp in het periplasma. Een studie naar de relatie tussen vouwing van Hbp in het periplasma en transport over het buitenmembraan laat uiteindelijk zien dat Hbp een zekere mate van flexibiliteit en/of beperkte omvang moet behouden om een blokkade van het translocatie apparaat in het buitenmembraan te voorkomen.